Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展很慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现胰脏自身抗形体到浮现1HG肾病临床全面性研究腹泻的方面亲率在老年人以前就有不错的所述，多个胰脏自身抗形体HIV的老年人中所有70%在毒素转换后10年末患上肾病，而随访15年的老年人这一%-增大到84%。相比之下，九成临床全面性研究1HG肾病一半以上的HG1HG肾病的胃癌选择性还无法获取充分的全面性研究。

愈来愈多的人开始运用于已确定系统来定义1HG肾病的方面：个形体在浮现多种胰脏自身抗形体时转入第1阶段性，浮现血糖极度时转入第2阶段性，浮现腹泻时转入第3阶段性。一些多发胰脏自身抗形体HIV的个形体，在1期和2期，方面较慢速，并工业发展为胃癌的1HG肾病。我们前所述了一组成员在首次侦测到多种胰脏自身抗形体样品后非常少10年无肾病的极快方面者，这组成员患儿总数少，但外观上非常说明。随后，我们找到胰脏自身抗原酪氨酸CD8+T肝细胞中间体在方面较慢速的患儿中所必需不存在，但在近期胃癌和肇因的肾病患儿中所很来得易侦测到。这可能说明，与方面患儿相比，这些患儿自身免疫中间体的可调提高。

早期全面性研究说明，尽管可调性T肝细胞(Treg)数量正常，但肾病患儿存在一些功能性有缺陷，其中所包括对IL-2的中间体能力增大。此外，肾病患儿中所的物理现象CD4+T肝细胞可能对可调来得具抵抗性，体现为物理现象T肝细胞的诱导减弱，自然造成了的Treg和形体外造成了的诱导Treg，以及抗原随之而来的CD4+T肝细胞中所IL-2中间体减弱。本全面性研究的目地是所述了CD4+可调性T肝细胞(Treg)在一小群极较慢速方面者中所的外观上，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX全面性研究是一项以人群为基础的交叉全面性研究，在21岁以下肺炎的患儿亲属中所检查1HG肾病的危险因素。我们前所述了近十年较慢速方面者的外观上，他们依然多重胰脏自身抗形体HIV超过10年，但无法浮现肾病的临床全面性研究腹泻，慢速性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续依然无肾病并不想透过大量血液样品的较慢速方面者纳入T和B肝细胞功能性分析。在现今的全面性研究中所，8名慢速方面者(SP组成员)，中所位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的胰脏自身抗形体HIV。所有的举例来说都西北面1HG肾病方面的1期，尽管一些人随后得不到了胰脏自身抗形体对某些抗原的HIV中间体，然而，一名患儿已经西北面2期非常少6年，但无法浮现临床全面性研究腹泻，一名患儿被诊断为肾病，该受试者72岁，在野外实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中所对该NAD来进行了原则上分析。剥离外周血单个核能肝细胞(PBMCs)，有别于多参数流式肝细胞术和T肝细胞诱导次测试分析NAD中所Treg的kHz、表HG和功能性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)来进行无监理聚类分析，分析Treg表HG。

结果：与心理健康NAD相比，来自慢速方面形体的潜意识CD4+T肝细胞的监理聚类说明了，激活的潜意识CD4+ TregkHz增大，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白质(GITR)表达出来增大有关。一名HbA1c升高的患儿与方面较慢速者和归一化的大鼠成员相比，Treg序有所有所不同。功能性分析说明，与心理健康NAD相比，来自较慢速方面形体的Treg介导的CD4+物理现象T肝细胞诱导微小受到破坏。体现为对物理现象CD4+T肝细胞CD25和CD134表达出来的诱导增大。

绘出1 全面性的表HG分析说明了，CD4+Treg亚HG在慢速方面表头中所增大。由FlowSOM填充的Treg室，组织起来在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标示物表达出来鉴定出10个元簇:潜意识T肝细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)运用于9个有所不同Treg标示填充的10个元簇的MST。每个节点均是由一个坦克部队(100个坦克部队)，来得大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点组成员周围制做。每个节点中所的碗绘出回应单个标示的表达出来级别。(b)每个元聚类的热绘出，以说明了整形体标示表达出来。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)填充绘出，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下丰度为每个metacluster筒1](丰度> 0.05%)确定为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T肝细胞(l)。黄色白点均是由人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检查。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 运用于CITRUS的预测模HG属实，TregkHz的增大是方面较慢速的标志。分级制度去极化(a - f)和柑橘分析(g-k)相比较SP举例来说和归一化的HD举例来说在CD4+CD45RA−T肝细胞上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的均是由性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来来进行剥离，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及NADSP 606(黄色)中所CD25+ cd127的kHz概要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化子集的筒1];(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)经济作物簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度着色，箭头突出的簇被辨认为SP和HD表头密切关系的有所不同。(j)筒1]说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员中所，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比之下丰度(%-)。(k)灰度说明了每个簇的表HG(白色)和Treg标示相比之下表达出来与背景表达出来(黄色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中所标示的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检查

绘出3 与心理健康献血者相比，方面较慢速者潜意识treg的GITR增大。每个潜意识CD4+T肝细胞元簇(潜意识T肝细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个表达出来标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的表达出来热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR表达出来结合，说明了灰度(c)和概要绘出(d)。Wilcoxon分组符号秩和检查，p< 0.07(黄色)所有NAD包括，p< 0.05(黄色)NADSP 606和归一化的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR表达出来，从分级制度去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)结合，说明了灰度(e)和概要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检查

绘出4 来自较慢速方面的CD4+ treg肝细胞依靠物理现象CD4+T肝细胞的能力增大。SP组成员用黄色的支线和白点回应，HD组成员用紫色的支线和白点回应，黄色的支线/白点回应NADsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标示为CFSE, Treg按仔细观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，培植3在此之后来进行流式肝细胞术侦测。(a-d)与CD4+；也者相比之下应的treg培植(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培植。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱导比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导比率。运用于HIV对照(激活的响应肝细胞不含treg)数值诱导比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

绘出5 物理现象CD4+T肝细胞对较慢速方面的T肝细胞重置的诱导来得尖锐。SP组成员用黄色的支线和白点回应，HD组成员用紫色的支线和白点回应，黄色的支线/白点回应NADsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞来进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标示，treg按仔细观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，培植3在此之后来进行流式肝细胞术(CD25反染)和肝细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培植。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱导百分亲率(b)。(c,d) CD25诱导百分亲率(c)和CD134诱导百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中所的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较慢速方面子的重置潜意识CD4+Treg在GITR表达出来中所获取了扩展和独特，强调了更进一步全面性研究Treg在1HG肾病风险个形体中所的互补的合理性。

中文翻译原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28